Hvernig á að rækta sviffrumur á rannsóknarstofunni?

Eins og við vitum öll má gróflega skipta þeim tegundum frumna sem ræktaðar eru á rannsóknarstofunni í tvær gerðir: viðloðandi frumur og sviffrumur, og aðeins nokkrar tegundir frumna eru til í báðum ríkjum.

Sviffrumur vísa til tegundar frumna sem geta vaxið í sviflausu ástandi í miðli án þess að treysta á stoðir, svo sem eitilfrumur og flestar blóðkerfisfrumurnar. (eins og músahvítblæðisfrumur WEHI-3, hvítblæðisfrumur úr mönnum K-562, HL-60). Í greininni hafa fleiri og fleiri viðloðandi frumur verið temdar og ræktaðar í fullri sviflausn. Sem stendur eru SP2/0, NS0, CHO, BHK og HEK293 frumur aðallega notaðar í iðnaðinum og þær eru aðallega notaðar til raðbrigða próteinframleiðslu; yfirferðarfrumur sem almennt eru notaðar í dýralíffræðilegar vörur innihalda aðallega BHK21 frumur ræktaðar í fullri sviflausn, MDCK frumur; og Vero frumur, PK frumur, ST frumur, Marc145 frumur o.s.frv. Með hjálp örbera sviflausnarræktunar hefur hver fruma mismunandi eiginleika.

Fjöðrafrumur

Fjöðrafrumur "thp-1" 200x

Almennt er auðveldara að meðhöndla sviffrumur en viðloðandi frumur vegna þess að ekki er þörf á trypsínvæðingu til að fara yfir sviffrumurnar. En þetta þýðir ekki að dreififrumur séu auðveldari í ræktun en viðloðandi frumur. Fyrir byrjendur er það meira krefjandi. Það eru alltaf ýmis vandamál: Til dæmis, hvers vegna koma dauðar frumur og frumuaðgreining alltaf fram; það er sammála um að yfirferðin sé auðveld, en niðurstaðan verður aðgreining; vandamál birtast aftur eftir frystingu og bata!

Næst skulum við ræða nokkur lykilatriði varðandi ræktun sviffrumna ~

Punktur 1: Nóg þolinmæði, hún er mjög nauðsynleg

Margar sviflausnarfrumur hafa tiltölulega lélega lífvænleika þegar þær eru nýkomnar úr frystingu. Á þessum tíma þurfum við að vera nógu þolinmóð til að bíða eftir að frumurnar ljúki sjálfviðgerð sinni og fari í logaritmískan vaxtarfasa. Til dæmis þarf THP-1 (einfrumuhvítblæði manna) oft 7-10 daga batatímabils frá þíðingu til eðlilegrar fjölgunar; Jurkat, Clone E6-1 (T eitilfrumuhvítblæðisfrumur úr mönnum) þurfa einnig 5-7 daga eftir bata. Farið aftur í ríkið fyrir frystingu. Byrjendur gætu hætt við þjálfun á þessu tímabili, svo vinsamlegast vertu þolinmóðari! Að rækta slíkar frumur er líka ferli til að rækta þolinmæði!

Punktur 2: Taktu sáningarþéttleikann

Almennt séð ætti þéttleiki sviffrumna ekki að vera lægri en 500,000/ML. Margar sviflausnarfrumur eru háðar þéttleika og útbreiðsluleysi af völdum lítillar þéttleika er einnig eitt af algengum vandamálum nýliða. Auðvitað eru mjög fáar frumur þar sem ástandið versnar þegar þéttleikinn er mikill, eins og W6/32 (mús B frumu blendingafrumur). Þess vegna er mjög mikilvægt að leita að viðeigandi upplýsingum til að átta sig á einkennum frumna áður en óþekktar frumur eru ræktaðar. Aðeins með því að þekkja sjálfan þig og óvininn geturðu unnið alla bardaga!

Tíðni miðlungs skipti ætti ekki að takmarkast við "klárlega". Frumur eru lífverur. Í samfelldri ræktunarlotu er hægt að bæta við sérstökum næringarefnum eins og viðbótarmiðli og glúkósa nokkrum sinnum eftir vaxtarstöðu frumanna til að viðhalda góðu vaxtarstöðu frumanna. . Meðan á sviflausnarræktunarferlinu stendur, með útbreiðslu frumna, neyslu næringarefna í upprunalega miðlinum og aukningu umbrotsefna, mun lífvænleiki frumna minnka og tímanleg viðbót næringarefna mun gera frumurnar í tiltölulega góðu umhverfi. Ég mun ekki fara í smáatriði hér og forðast tíða skilvindu og vökvaskipti.

Við skulum tala um vökvaskiptaaðferðina:

① Miðflótta full vökvaskiptaaðferð‍

Það er að segja að fjarlægja allan gamla miðilinn með skilvindu (800-1000rpm, 5mín) og setja ferskan miðil í staðinn. Þessi aðferð er hentug til miðlungs endurnýjunar á "skin solid" vel upphækkuðum sviffrumum (svo sem K562), eða núverandi ástandi þar sem frumurnar eru í góðu ástandi og þéttleiki er mikill, sem leiðir til mikillar neyslu á miðli. Kosturinn við þessa aðferð er að skipt er rækilega um miðilinn og hægt er að fjarlægja sumt frumurusl, en það mun einnig valda ákveðnum vélrænni skemmdum á frumunum.

② Miðflótta hálfskiptiaðferð

Það er að segja, með því að miðflótta (800-1000rpm, 5mín) 50 prósenta frumusviflausn, skipta um 50 prósent rúmmál af fersku miðli. Þessi aðferð hentar til að bera saman „hræsnarar“ frumur sem erfitt er að rækta (eins og thp-1), eða aðstæður þar sem þéttleiki er lítill en fjarlægja þarf meira rusl í aðlögunarástandi.

③Sedimenting vökvaskiptaaðferð

Það er að segja, í stað þess að nota skilvindu, er aðferðin við náttúrulegt botnfall með þyngdarafli notuð til að aðskilja miðilinn frá frumunum, til að skipta um allan eða hluta ferska miðilsins. Hins vegar hefur það takmarkanir á notkun - það er aðeins hentugur fyrir frumur sem geta myndað frumuþyrpingar af ákveðinni stærð (annars geta þær ekki sest náttúrulega og aðeins hægt að skila þeim á lágum hraða), sérstaklega þegar um er að ræða frumur sem treysta á frumusamsöfnun til að fjölga sér. , eins og NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Þessi aðferð getur lágmarkað vélrænan skaða af völdum skiljunarferlisins meðan á vökvaskiptaferlinu stendur, á sama tíma og uppsafnaðan frumumassa er haldið og fjarlæging á frumurusli er tiltölulega ítarleg.

Eftir að hafa náð tökum á ofangreindum atriðum, auk góðs frumufræja, er rétt handan við hornið að rækta "fallegar" sviffrumur!

frumuræktunarplötu

U-laga frumuræktunarplata Yongyue Medical er aðallega notuð til að rækta sviffrumur með pólýstýreni (PS), framleidd á 100,000-stiga hreinsunarverkstæði, dauðhreinsuð með geislun, laus við DNase, RNase og pyrogen -ókeypis, öryggi og umhverfisvernd.

Frumuræktunarplötur eru fáanlegar í ýmsum forskriftum til að mæta þörfum ýmissa bakteríurækta. Vörutegundunum er skipt í 6-jæja, 12-jæja, 24-jæja, 48-jæja, 96-jæja og 384-jæja, af sem 96-brunn skiptist í flatbotn, U-botn, V-botn; U-laga ræktunarplötur eru aðallega notaðar til að rækta sviflausnfrumur; V-laga ræktunarplötur eru aðallega notaðar fyrir ónæmisfræðilegar blóðkekkjutilraunir.