Í dag skulum við tala um lykilþátt í PCR tilraunum - rekstrarvörur. Sem tíður gestur PCR er nauðsynlegt að skilja eiginleika og hugtök sem tengjast PCR rekstrarvörum.
Það er mikið úrval af PCR rekstrarvörum á markaðnum, þar á meðal vörumerki, forskriftir, litir osfrv., sem eru töfrandi. Við skulum skilja það skref fyrir skref.
pcr plötu
1. Efni
Venjulega er hráefnið í PCR rekstrarvörum pólýprópýlen. Það er gott hitaþolið óvirkt efni. Vinnuhitasviðið er -30 til 140 gráður, sem gerir það kleift að standast hitaorkubreytingar á hitaferli PCR hvarfsins og gegnir góðu hlutverki við að þétta og vernda efnin í PCR hvarfkerfinu.
Lærðu meira um pólýprópýlen
2. Litur
Algeng eru hvít rör og gagnsæ PCR rör. Í hefðbundnum PCR tilraunum er enginn munur á þessu tvennu. Hins vegar, í sömu rauntíma/qPCR tilraun, voru hvít rör tiltölulega næmari og samkvæmari fyrir qPCR tæki með apical merki lestri (sjá myndir A og B hér að neðan). afhverju er þetta svona?
pcr rör
A: lægri Ct gildi fyrir hvíta rör samanborið við glær rör; B: betri endurtekningarhæfni með hvítum rörum.
Kjarnagögn qPCR eru Ct gildið og flúrljómunarmerkið er gagnagjafinn til að reikna út Ct gildið, svo það er mjög mikilvægt hvort flúrljómun í rörinu sé hægt að senda alveg til skynjarans. Hvíti rörveggurinn kemur í veg fyrir að flúrljómunin fari í gegnum rörvegginn og brotni (Mynd A hér að neðan) og kemur þannig í veg fyrir að flúrljómunin berist í hitunarblokkina (þ.e. vegg málmgatsins þar sem rörið er komið fyrir) og gleypist eða endurspeglast í ósamræmi í blokkinni. Sterkara og einbeittara flúrljómunarmerki var safnað á enda hvíta rörsins samanborið við glæra rörið (Mynd B hér að neðan).
pcr rör
A: Breytingin á flúrljómunarmerkinu í gagnsæju rörinu og hvíta rörinu; B: Samanburður á styrkleika flúrljómunar eftir að sama magni af flúrljómun hefur verið bætt við.
Þannig að ef þú ert að nota qPCR hljóðfæri með topplestur skaltu prófa hvítar slöngur.
3. Gæði (Lean or Not Lean)
Hér er lögð áhersla á mikilvægi neyslugæða. qPCR rekstrarvörur verða að vera lausar við aðskotaefni og hemla. Háþrýstingur og geislun fjarlægja bakteríur og DNasa, en ekki ryk og DNA leifar, sem geta hindrað PCR viðbrögð eða framkallað ósértæka mögnun. Efni hafa gleypni og jafnvel örsmá mengunarefni munu gleypa flúrljómunina í hvarfkerfinu og hafa áhrif á söfnun flúrljómunarmerkja. Notuð var ýkt útgáfa af tilrauninni til að sýna fram á áhrif óhreinindamengunar á tilraunina. Eins og sést á myndinni hér að neðan var óhreinindi sett í eina hvarfholu áttundarinnar. Eins og við var að búast sýndu mögnunarferlar merkjanleg frávik.
Óhreinindi í PCR hvarfrörum
↑ Óhreinindi í viðbragðsrörinu
8 ræmur
↑ Endurtekin viðbragðsniðurstöður fyrir 8 túpur, óhreinindi í vinstri holunni „víkur“ frá ferlinum.
Áminning: Gættu þess að útsetja ekki rekstrarvörur í lofti í langan tíma. Eftir að rekstrarvörur eru teknar út, vertu viss um að innsigla umbúðapokann fljótt til að forðast að snerta hann með berum höndum. Ef mögulegt er skaltu vinna á hreinum bekk.
4. Stærð / Stærð / Flux
Rúmmálið ákvarðar hversu mikið sýni (hvarfmagn) er hægt að hlaða. Ofskömmtun getur leitt til minni skilvirkni varmaflutnings, leka eða krossmengunar; vanskömmtun getur leitt til taps á uppgufunarsýni. Hitablokk qPCR tækisins mun einnig ákvarða viðeigandi rekstrarvörur og viðeigandi stærð hvarfkerfis. Afköst er auðvelt að skilja, það er hámarksfjöldi sýna sem hægt er að hlaða í einni tilraun. Algengar forskriftir fyrir afkastagetu og flæði eru sýndar í töflunni hér að neðan:
Eitt rör/átta raðir {{0}}.2mL, 0.1mL
{{0}}brunnsplata 0.2mL, 0.1mL
{{0}}brunnsplata 0,2mL
Afkastagetulýsingunum er einnig almennt skipt í staðlaðar og lágar gerðir, eins og sýnt er hér að neðan. Lágsniðið rekstrarvörur hafa lægri hæð. Þessi stutta hönnun lágmarkar plássið fyrir ofan hvarfkerfið ("dautt rúmmál" - gagnslausi hlutinn), dregur úr áhrifum uppgufunar meðan á hitauppstreymi stendur og gerir hitaeiningunni kleift að vefja um það í meira mæli til að bæta skilvirkni varmaflutnings. Þess vegna eru lágsniðsrör einnig þekkt sem "hröð" rör eða plötur.
pcr rör
Áminning: Almennt notað hvarfrúmmál er 20 µL og mælt er með því að nota lítið magn hvarfglass sem er 0,1 ml eða lítið rúmmál.
5. Veggþykkt
Þykkt rörveggsins hefur bein áhrif á hitaleiðni. PCR rekstrarvörur ættu að hafa samræmda veggþykkt til að veita stöðugan hitaflutning. Ofur-þunnur rörveggurinn er 50 prósent þynnri en staðalútgáfan, sem dregur enn frekar úr varmahindruninni og hefur hraðari og betri viðbragðsáhrif. Þess vegna, til að hámarka skilvirkni PCR viðbragða og tryggja stöðug og skilvirk viðbrögð, eru samræmdar og ofurþunnar PCR rekstrarvörur besti kosturinn.
6. Gagnsæi
Hettur og þéttifilmur fyrir qPCR krefjast mikillar ljóssskýrleika til að tryggja hámarks skarpskyggni og sendingu flúrljómandi merkja á sama tíma og það dregur úr röskun (fyrir qPCR tæki sem eru efst lesin). Því hærra sem gagnsæi rörveggsins er, getur það haft áhrif á niðurstöður tilrauna. Ástæðan hefur verið útskýrð hér að ofan. Hefðbundin PCR getur hunsað þennan eiginleika.
7. Pils
Pils PCR plötu vísar til útlægrar framlengingar plötunnar. Þegar búið er að byggja viðbragðskerfi virkar pilsið sem stöðugur stuðningur við píptuferli og veitir vélrænan styrk og grip þegar það er sameinað sjálfvirkum vinnustöðvum. Það eru þrjár algengar gerðir af pilsum, hálf pils og heil pils (sem samsvarar A, B og C á myndinni hér að neðan).
Pilslaust: Hægt að nota með flestum PCR eða qPCR tækjum, en ekki fyrir sjálfvirk forrit. Auðvelt að hreyfa við pípettingu, ekki mjög stöðugt, þarf að nota með plötuhaldara.
Hálfpils: Tilvalið fyrir sjálfvirka notkun með góðum pípettunarstöðugleika.
Full pilsplata: Tilvalin fyrir sjálfvirka notkun. Góður vélrænn styrkur, hentugur fyrir PCR tæki með útstæðum einingar, mikill stöðugleiki við pípettingu.
pcr plötu
Ábendingar: Mikilvægi pilssins er meira til að auðvelda iðnvæðingu og sjálfvirka lotuvinnslu ásamt vélfæraarminum. Það er kannski ekki þörf á hefðbundnum rannsóknarstofum, ekkert pils er nóg.
pcr plötu
8. Parafilm
PCR plötuþéttingarfilman er úr glæru plasti eða álpappír. Límgagnsæjar filmur eru algengari, hentugar fyrir 96 eða 384 brunna plötur og ættu að hafa nægilega góða ljósgeislun. Þegar filman er innsigluð verður lítið kort notað til að þrýsta filmunni í kringum þéttingargatið til að forðast loftleka.
Límandi álfilmur geta verið sjaldgæfari. Þó að það henti ekki fyrir qPCR er það tilvalið neysluvara fyrir ljósnæm sýni. Vegna þess að hægt er að kýla það auðveldar það sýnaflutning í PCR (fyrir hefðbundna PCR).
PCR plötuþéttingarfilma
Tekið saman
Sem flutningsaðili PCR kerfis eru rekstrarvörur mjög mikilvægar til að bæta gæði tilraunagagna. Ég vona að þessi miðlun geti hjálpað þér að skilja nokkrar ábendingar um PCR rekstrarvörur og veitt hjálp við betra val á rekstrarvörum.