Frumuræktunarplötur eru almennt notaðar og mikilvægar rekstrarvörur í frumuræktunartilraunum vegna þess að þær geta sparað tíma og hvarfefnisefni fyrir frumutilraunir og geta sett upp margar kvikar breytur á sama tíma til að auðvelda athugun og greiningu.
menningarplata
1. Lokin á 96, 24-brunnsræktunarplötum eða petrídiskum eru mjög laus, sem er þægilegt fyrir loftræstingu, en munu bakteríur, mygla og önnur mengunarefni líka renna inn?
Svar: (1) Hlífin er mjög laus og tilheyrir hálfopinni menningu. Tilgangurinn með þessu er að anda (í rauninni til að gera kleift að skipta CO2 utan ræktunarskálarinnar að fullu út við ræktunarskálina til að viðhalda pH gildi miðilsins).
(2) Það eru kostir og gallar, sem eykur möguleika á mengun. Að auki veldur þetta því að vökvinn í petrískálinni gufar upp, sem er áberandi fyrir nákvæma skömmtun lyfja. Þess vegna eru eftirfarandi tvær ráðstafanir nauðsynlegar:
a) Loftið í hitakassanum verður að vera hreint (venjulegt útfjólublátt ljós, alkóhólskúr og kveikja og slökkva á hitaskápnum eins lítið og mögulegt er)
b) Raki í hitakassa verður að vera 100 prósent allan tímann (vaskur þar sem dauðhreinsað eimað vatn er sett í útungunarvélina). Gefðu gaum að smitgát!
2. Frumurnar mínar eru sáðar á ræktunarplötuna og frumurnar safnast alltaf saman í útlæga hlutanum. Hvað ætti ég að gera? Ég sé að klefar sumra vopnafélaga eru samankomnar í miðjunni. Er það vandamál með gæði plötunnar?
A: Hvernig blandarðu frumunum þínum? Er það pípetta að blása eða hrista ræktunarplötuna? Ef það er hið síðarnefnda, og það er hrist í hring, er mjög líklegt að frumurnar muni kastast til nærliggjandi hluta vegna miðflóttakraftsins, sem leiðir til þess að frumurnar séu í miðjum. Minna, meira en fjórar vikur! Þú getur prófað það sjálfur!
Góð leið: áður en þú ræktar fræplötuna skaltu setja ræktunarplötuna í hitakassa í nokkrar klukkustundir af mettun og taka hana svo út. Þegar frumurnar eru sáðar ætti krafturinn að vera léttur. Hægt er að nota dripper á hlið ræktunarplötuholsins hægt og rólega. Bætið hægt við til að leyfa frumusviflausninni að flæða inn í brunna plötunnar og ræktuðu frumurnar vaxa að mestu jafnt. Mundu að hrista aldrei sveifluna eða frumurnar þínar klumpast saman eins og þú sagðir.
3. Frumurnar mínar fara eðlilega yfir, en þegar ein tegund fer í sex-brunn plötu (óháð lyfjaviðbót og eftirliti) eru alltaf tvær eða þrjár holur (tilviljanakenndar) frumur sem vaxa ekki vel, eru litlar og virðast að vera brotinn. Hefur einhver lent í þessu? Hver er ástæðan?
A: Það gæti tengst hitastigi vökvans sem þú bætir við. Ef frumurnar þínar hafa nýlega verið teknar út til að skipta um miðil og bæta við miðlinum og miðillinn er líka tekinn úr 4 gráðu kæli fljótlega, þá er auðvelt fyrir frumurnar að frjósa til dauða. Mælt er með því að þú ræktir miðilinn fyrst í útungunarvélinni í 15 mínútur.
Að auki er það einnig tengt vaxtarástandi frumna þinna. Hægt er að rækta frumur fyrir skömmtun með háum styrk í sermi. Gakktu úr skugga um að frumurnar séu í góðu ástandi.
Eða það er hægt að rækta það í 37-gráðu vatnsbaði, eða vandamálið við ræktunarplötuna sjálfa, þú getur prófað annan ræktunarplötu. Annar möguleiki er frumuástandsvandamálið, stilltu sermisstyrkinn þegar þú sáð plötuna.
4. Undanfarna daga notaði ég sex-brunn ræktunarplötu til að sáð frumur. Eftir ræktun í 24 klukkustundir skipti ég um miðil. Áður en ég skipti um miðil tók ég eftir því að frumurnar festust við vegginn og ástandið var mjög gott. Eftir að hafa skipt um miðil notaði ég smásjána strax. Í ljós kom að næstum helmingur frumna í hverri holu sýndi nær dauða. Frumurnar verða mjög litlar og framleiða mikið rusl en hinn helmingurinn af frumunum er eðlilegur, það eru vatnaskil á milli óeðlilegra frumna og eðlilegra frumna, efri hálfhringurinn er góður, neðri hálfhringurinn er ekki góður, hvernig er þetta? Hvað er að?
A: Þú getur séð hvort það eru einhverjar af eftirfarandi ástæðum
a. Ræktunarplatan er ekki sett lárétt;
b. Hvað með ræktunarmiðilinn þinn, ef ræktunarmiðillinn rennur út munu frumurnar ekki festast. Prófaðu nýlagað miðil
c. Það getur verið vandamál plötunnar. Það er ekkert mál að skipta um disk af annarri tegund eða nota ræktunarflöskuna.
d. Tókstu eftir áhrifum viftunnar þegar skipt var um miðil, sérstaklega þegar það eru margar ræktunarplötur sem þarf að skipta um, það er auðvelt að valda því að frumurnar skreppa saman og rifna vegna vinds og vatnstaps. Ef svo er, ætti að skipta um miðil einn í einu, og ekki vera hræddur við að sóa pípettunni, gaum að skilvirkni aðgerðarinnar!
5. Það eru fjórir dagar síðan frumurnar voru meltar og sáðar í 24-brunnsplötu og miðhluti hvers brunns var alltaf fullur. Miðillinn var þveginn með PBS á hverjum degi og sama staða kom upp þegar skipt var um miðil daginn eftir. Brúnirnar eru vel langar og miðjan er full af dauðum frumum?
Svar: Ef frumurnar eru þéttar í kring og fáar í miðjunni, þá eru um það bil eftirfarandi ástæður:
Miðlinum var bætt við of lítið. Aðallega vegna vandamálsins við vökvaspennu.
Hvort það er minna vatn neðst í hitakassa;
Hristingurinn eftir frumusáningu var of mikill. Frumurnar dreifast um vegna miðflóttaaflsins.
Lykillinn að því hvort frumurnar dreifist jafnt er að hver tegund fruma hefur einstaklingsmun og frumuaðgerðir annarra gætu ekki hentað þér. Svo þú verður að kanna á eigin spýtur og finna sett af reglum sem eru einstök fyrir þínar eigin frumur. Þú hefur eftirfarandi reynslu:
(1) Öllum frumusviflausnum sem á að sá verður að blanda með pípettu áður en sáð er.
(2) Samkvæmt gögnum er vökvarúmmál 24-brunnsplötunnar 1ml, í raun er rúmmálið 1ml nóg.
(3) Við sáningu skal bæta sýninu hægt við og muna að snúa pípettuoddinum aðeins. Ekki er hægt að bæta við sýninu of hratt til að koma í veg fyrir að frumur safnist saman á einum sýnisstað og gaum að því að bæta við sýnum í mismunandi hlutum, það er að segja á meðan hreyfanlegu byssunni er bætt við. Höfuð, gervi gera frumurnar hafa tilhneigingu til að vera jafnt dreift. Að gera það hefur þau áhrif að frumurnar dreifast jafnt.
