Polymerasa keðjuverkun (PCR) er ein þekktasta aðferðin í lífvísindarannsóknarstofum.
PCR plötur eru gerðar úr fyrsta flokks plasti fyrir framúrskarandi meðhöndlun og greiningu á söfnuðum sýnum eða niðurstöðum.
Þeir hafa þunna, einsleita veggi sem veita nákvæma hitaflutning.
Til undirbúnings fyrir rauntímanotkun eru örsmá brot af DNA eða RNA einangruð og geymd í PCR plötum.
PCR plötur eru mjög duglegar við hitaþéttingu og takmarka einnig hitaflæði.
Hins vegar, vegna þess að PCR plötur eru skilvirkar og áreiðanlegar, eru þær viðkvæmar fyrir villum og ónákvæmni við vinnslu sýna.
Svo ef þú hefur áhuga á að fá góða PCR plötur. Best er að hafa samband við áreiðanlegan PCR plötuframleiðanda. Með þessu geturðu verið viss um að fá besta verðið.
Hér að neðan eru nokkrar varúðarráðstafanir til að forðast mengun hvarfefna eða sýna og til að koma í veg fyrir ónákvæmar niðurstöður.
Sótthreinsaðu umhverfið
Rangar jákvæðar eða neikvæðar niðurstöður vegna nærveru óhreininda geta valdið því að þú efast um niðurstöðurnar.
Óhreinindi og aðskotaefni koma í ýmsum myndum, svo sem óskyld DNA eða efnaaukefni, sem að lokum draga úr skilvirkni og skilvirkni hvarfsins.
Það eru margar leiðir til að draga verulega úr mengunarhraða PCR plötum.
Notkun dauðhreinsaðra síuodda er önnur gagnleg leið til að koma í veg fyrir að óhreinindi komist inn í sýnið í gegnum pípettuna.
Alveg hreint sett af búnaði, þar á meðal pípettum og rekki, er útvegað sérstaklega fyrir PCR notkun. Þetta mun tryggja hverfandi flutning óhreininda eða mengunarefna um rannsóknarstofuna.
Notaðu bleikju, etanól á pípettur, rekka og bekki til að þurrka af mengun.
Úthlutaðu fráteknu plássi fyrir öll PCR viðbrögð til að draga enn frekar úr agnamengun.
Notaðu hreina hanska við hvert skref og skiptu um þá oft.
PCR plötu
Athugaðu styrk og hreinleika sniðmátsins.
Halda skal hreinleika bekkja og búnaðar sem notaður er til að greina sýni með PCR. Mikilvægt er að sannreyna hreinleika sýna fyrir greiningu og vinnslu.
Venjulega tekur greiningartækið tillit til styrks og hreinleikastigs DNA sýnisins.
Gleypihlutfallið 260nm/280nm ætti ekki að vera minna en 1,8. Óhreinindin voru síðan auðkennd með bylgjulengdum á milli 230nm og 320nm.
Í einu dæmi voru kaótrópísk sölt og önnur lífræn efnasambönd greind við gleypni upp á 230 nm. Greina og sannreyna samtímis grugg í DNA sýnum við gleypni við 320nm.
Forðastu ofhleðslu PCR plötur og vörur
Þó að æskilegt sé að keyra margar vörur á sama tíma getur það leitt til krossmengunar á PCR plötum.
Ofhleðsla PCR plötur með mismunandi vörum er sóun og gerir það erfitt að bera kennsl á sýni.
Haltu skrár yfir skammta af PCR hvarfefnum
Stöðugar frystingar/þíðingarlotur og tíð notkun skammta getur skaðað PCR hvarfefni, ensím og DNTP með endurkristöllun.
Reyndu alltaf að fylgjast með hlutfalli deilna sem notaðir eru þegar sýni eru undirbúin til greiningar.
Æskilegt LIMS hentar betur til að stjórna birgðum og magni hvarfefna og sýna sem á að frysta eða þíða.
Veldu ákjósanlegasta hitastig fyrir glæðingu.
Að velja og nota rangt glæðuhitastig er önnur leið sem PCR niðurstöður innihalda villur.
Stundum fara viðbrögðin ekki eins og áætlað var. Lækka þarf hitastigið við glæðingu til að stuðla að árangursríkri viðbrögðum.
Hins vegar, lækkun hitastigsins eykur líkurnar á fölskum jákvæðum og primer-dimerum.
Þegar PCR plötur eru notaðar er mikilvægt að staðfesta greiningu bræðsluferilsins þar sem hún er góð vísbending til að velja réttan glæðuhitastig.
Grunnhönnunarhugbúnaður hjálpar til við hönnun, veitir réttan glæðuhitastig, dregur beint úr villum í PCR plötum.
pcr plötu